DNA甲基化修饰相关研究方案

DNA甲基化(DNA methylation)为DNA化学修饰的一种形式,能够在不改变DNA序列的前提下,改变遗传表现。所谓DNA甲基化是指在DNA甲基化转移酶的作用下,在基因组CpG二核苷酸的胞嘧啶5号碳位共价键结合一个甲基基团。大量研究表明,DNA甲基化能引起染色质结构、DNA构象、DNA稳定性及DNA与蛋白质相互作用方式的改变,从而控制基因表达。

一、DNA甲基化修饰相关产品

DNA甲基化修饰研究手段——DNA亚硫酸盐转化,使用亚硫酸氢钠将胞嘧啶转化为尿嘧啶,而5-甲基胞嘧啶(5-mC)保持完整。 即未甲基化的胞嘧啶残基被脱氨成尿嘧啶,甲基化的胞嘧啶(5-mC)残基不受影响,这使PCR扩增可将尿嘧啶视为胸腺嘧啶,将5-mC或5-hmC识别为胞嘧啶。 这样便能够区分甲基化和未甲基化的胞嘧啶残基,从而提供有关DNA甲基化区域的单核苷酸分辨率信息。

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要成功地进行DNA甲基化研究,必须进行完全转化,并减少通常由于严酷的化学反应而导致的DNA降解量。基于亚硫酸氢盐和亚硫酸氢钠的方法是用于研究DNA甲基化并帮助制备基因组DNA进行基因特异性DNA甲基化分析的常用方法。 亚硫酸氢盐转化后通常是下游应用,在基因特异性基础上分析DNA甲基化的流行下游方法包括亚硫酸氢盐测序,甲基化特异性PCR(MS-PCR)和基于甲基化的微阵列。

整个转换过程中,高质量的DNA是至关重要的,因为转换过程中的酸性物质会破坏DNA。而对于大规模亚硝酸氢盐转化实验,高通量选择对于节省时间和降低成本至关重要。

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此外,还有高通量DNA修饰试剂盒,EpiNext高灵敏度亚硫酸氢盐测序试剂盒(Illumina),一步法DNA修饰试剂盒,Methylamp通用甲基化DNA试剂盒,Methylamp全细胞亚硫酸氢盐修饰试剂盒等。

二、甲基化DNA PCR & NGS 分析试剂盒

上面我们了解了DNA甲基化修饰相关的产品,也了解了DNA经过修饰后适用于下游分析:如亚硫酸氢盐测序、甲基化特异性PCR(MS-PCR)和基于甲基化的微阵列。是不是认为找产品太麻烦了?

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三、甲基化DNA免疫沉淀

甲基化DNA免疫沉淀(meDIP)是一种基于抗体的大规模技术,用于富集和捕获甲基化DNA片段,可用于在基因组范围内进行基因特异性DNA甲基化研究。 遵循meDIP方法,可以使用多种下游应用程序分析DNA甲基化,包括meDIP-PCR,meDIP-ChIP和meDIP测序。

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我们来看看富集的效果,系列图分别对应p-1015,p-1038,p-1052

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四、DNA甲基化抗体

具有良好特征和高度验证的DNA甲基化抗体和DNA去甲基化抗体可能有助于提高研究人员对DNA甲基化及其在疾病、细胞周期调控和胚胎发育中的作用的理解。如:

5-Hydroxymethylcytosine (5-hmC) Monoclonal Antibody [HMC/4D9],A-1018,适用实验类型:DB, ELISA, hMeDIP, IF, IHC;

DNMT1 Monoclonal Antibody [60B1220.1],A-1001,适用实验类型:ELISA, IF, IP, WB

DNA甲基化链接:

http://www.amyjet.com/featured/dna-methylation-3.shtml

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