1 miRNA切割之后mRNA在第十或第十一个碱基产生两个片段，第一个片段是5'帽子结构和3'羧基。3'剪切片段包含自由的5'单磷酸和3'poly(A)尾巴。
2 利用5'adaptor可以与5'单磷酸基团的RNA连接，而缺乏5'单磷酸的基团无法连接捕获miRNA的切割产物，随后使用oligo(dt)3'-adapter将连有5'-adaptor的3'切割产物反转录成cDNA，扩增cDNA后，使用限制性内切酶Mme I对PCR产物进行酶切，酶切长度在20-21bp。将酶切后的3'双链DNA adaptor连接并进行PCR扩增，产物凝胶纯化之后，建立一个包含经miRNA切割的3'端剪切片段文库，用于测序。