SnapGene教程:聚合酶链式反应(PCR)

  什么是PCR?  

聚合酶链式反应(PCR),有时也称“分子复印(molecular photocopying)”,是一种快速且低成本的技术,用于扩增/复制DNA的小片段。由于分子和遗传分析需要大量的DNA样本,因此如果不进行PCR扩增,几乎不可能对分离的DNA片段进行研究。PCR通常被誉为分子生物学最重要的科学进展之一,它在一定程度上革新了DNA研究。

  PCR可以应用在哪些地方?  

扩增之后,PCR产生的DNA可用于许多不同实验室程序。例如,Human Genome Project(HGP)中大多数作图技术都依赖于PCR。同时PCR在许多实验室和临床技术中也很有价值,包括DNA指纹图谱、细菌或病毒(尤其如AIDS)的检测以及遗传疾病的诊断等。

  PCR是如何进行的?  

为采用PCR方法扩增DNA片段,需要:

  • 加热Sample,使DNA变性或分离成两条单链DNA;

  • 一种称为“Taq聚合酶(Taq polymerase)”的酶以原始链为模板,合成—构建—DNA的两条新链;

这个过程使原始DNA复制,每个新分子都包含一条旧的DNA链和一条新的DNA链。然后,这些链中的每一个都可以用于创建两个新副本,以此类推。变性和合成新DNA的循环重复多达30至40次,使得超过10亿个原始DNA片段的精确复制。

PCR的整个循环过程是自动化的,仅需几个小时即可完成。 整个过程通过热循环仪完成,该仪器被设置为每隔几分钟改变反应温度以促使DNA的变性和合成。

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