流式细胞术丨EXBIO流式同型对照抗体解决方案

流式细胞术(Flow Cytometry,FCM)是一种对液流中排成单列的细胞或其它生物微粒(如微球,细菌,小型模式生物等)逐个进行快速定量分析和分选的技术。

一、为什么要用同型对照?

同型对照是使用与一抗相同种属来源、相同亚型、相同剂量和相同的免疫球蛋白及亚型的免疫球蛋白,用于消除由于抗体非特异性与细胞结合而产生的背景染色。同型对照是真正意思上的阴性对照,它不但可以用来设定流式细胞仪的电压,而且还可以帮忙省去昂贵与繁琐的重组细胞因子竞争封闭步骤。

二、如何选择同型对照?

分析流式结果时,不能因为得到了荧光信号就判断细胞表面肯定结合有相应的荧光素,从而得出细胞表达相应的抗原分子的结论,而应该比较该荧光信号与细胞的非特异性荧光,如果得到的荧光信号大于非特异性荧光,说明得到的荧光信号部分来源于荧光素的特异性荧光,就可以得出细胞表达相应的抗原分子的结论。

所以,确定与荧光素无关的细胞自身的非特异性类光的强弱非常重要,而设立阴性对照就是为了确定细胞的非特异性荧光。

看看以下3类艾美捷整理的阴性对照流式分析比较全面的阴性对照:

在这里插入图片描述

第1类“negative”表示的是不加任何荧光素偶联抗体时得到的荧光信号,因为没有标记任何类光素,所以这组得到的荧光信号与荧光素无关,与细胞抗原分子CD69是否表达无关,得到的荧光信号代表的是非特异性荧光信号;

第2类“抗CD69”表示的是用抗CD69抗体标记样品细胞后得到的类光信号,虽然抗CD69抗体能修与细胞表面的CD69抗原分子结合,但是抗CD9抗体没有偶联荧光素,所以得到的荧光信号也与细胞表面是否表达有CD69分子无关,得到的荧光信号代表的也只是细胞本身的非特异性荧光信号,这种对照用于排除抗体的干扰;

第3类“IgG1-PE”表示的是标记与抗CD69抗体同种属(来源于同一物种)且同类(抗CD69-PE中的抗体IgG1类的)的非特异性抗体(IgG1)与PE荧光素偶联的同型(isotype)对照抗体(IgG1-PE)后,得到的荧光信号,这种就属于同型对照,其不能与细胞表面的CD69发生特异性结合,所以细胞表面不会结合有IgG1-PE,zui后得到的荧光信号是代表细胞本身的非特异性荧光,不属于PE荧光素产生的特异性荧光信号,这种同型对照用于排除荧光素的干扰。

以上3种阴性对照,并不用全部设置齐全,一般只需要设置1种阴性对照就可以,其中第3种同型对照是zui常规的阴性对照设置法。

以下荧光标记同型对照抗体案例展示:

2.png

使用小鼠IgG3同种型对照(PPV-07)DyLight®650抗体(样品中浓度为5ug/ ml)对人外周血进行的流式细胞仪表面非特异性染色模式。

更多类型荧光标记的同型对照抗体:

https://www.amyjet.com/featured/flow-cytometry.shtml

猜你喜欢

转载自blog.csdn.net/abbkine/article/details/113989724
今日推荐